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Come lavorare con l'RNA?

🧪Consumabili >
✔️ >Utilizzare provette in polipropilene, monouso, sterili e >puntali >sterili, esenti da RNasi. >
✔️ >Per quanto possibile, mantenere le provette chiuse durante la preparazione. >
✔️ >Prima dell'uso, la vetreria dovrebbe essere trattata in stufa per almeno 2 ore a 250 °C. >

🧤Ambiente di lavoro >
✔️ >Indossare guanti durante la preparazione di RNA e cambiarli frequentemente in modo da creare un ambiente di lavoro il più possibile esente da RNasi. >
✔️ >Evitare di operare in prossimità di eventuali altre analisi che impieghino RNasi.  >
✔️ >Se usi RNasi per altre analisi, cambia il camice prima di iniziare la preparazione di RNA. >
✔️ >L'ideale sarebbe dedicare una specifica postazione alla preparazione esclusiva di RNA.  >
✔️ >Minimizza le comunicazioni durante la preparazione o utilizza una mascherina per prevenire che goccioline di saliva contenenti RNAsi interferiscano con il tuo campione. >

🧬Protezione del campione >
✔️ >Dove possibile, usare campioni freschi. In alternativa, è possibile proteggere i campioni di RNA dalla degradazione nei modi seguenti: >

>📌Congelamento in azoto liquido;
📌Stoccaggio in >ultracongelatori a -80 °C >;
📌Utilizzo di reagenti stabilizzanti come NucleoProtect® RNA;
📌Evita lo scongelamento dei campioni prima del contatto con il buffer di lisi! >

📑Preparazione del campione >
✔️ >Mantieni l'attrezzatura fredda e esegui la preparazione del campione in azoto liquido. Se hai difficoltà, controlla i protocolli Macherey Nagel per i kit RNA: contengono istruzioni specifiche per la corretta preparazione dei tuoi campioni. >

🌡️Stoccaggio >
✔️ >Conserva sempre l'RNA eluito in ghiaccio per garantire una stabilità ottimale. Conservalo a -20°C per brevi periodi e a > -70°C per lungo termine >. >
✔️ >Se devi accedere all'RNA isolato frequentemente, aliquotalo in piccoli volumi in modo da evitare successivi cicli di congelamento-decongelamento che riducono l'integrità dell'RNA. >
✔️ >Quando scongeli i tuoi campioni, fallo sempre in ghiaccio per evitare la degradazione dell'RNA. >

La tua sfida, la nostra soluzione

Sangue Batteri e lieviti

Sfida

✔️Anticoagulanti (tipicamente EDTA) che possono inibire le analisi successive.

Soluzione

✔️Lavaggio con 2 diversi tamponi per la rimozione di sali, metaboliti e macromolecole cellulari.
NucleoSpin RNA Blood

Sfida

✔️Distruzione della struttura fisica della cellula.

Soluzione

✔️Lisi del campione mediante biglie con provette MN Bead tipo B (biglie in vetro) (non incluse)
NucleoSpin RNA

Plasma e fluidi biologici Piante e funghi

Sfida

✔️Purificazione di small RNAs.

Soluzione

✔️Speciale chimica del tampone che permette la purificazione di small RNAs (>18 nt).
NucleoSpin miRNA Plasma
 

Sfida

✔️Inibitori come amido, zucchero,
metaboliti secondari e altri composti;
✔️Struttura fisica di semi,
radici, gambi, aghi, etc.
✔️Frammenti cellulari che possono bloccare la colonna. 

Soluzione

✔️2 differenti tamponi per rimuovere le impurità e i metaboliti;
✔️Rimozione di frammenti di piante con 
NucleoSpin® Plant and Fungi
Filter;
✔️Preparazione del campione con provette MN Bead
tipo G (in acciaio),
tipo C (in corindone)
(entrambe non incluse).
NucleoSpin RNA Plant and Fungi

Virus Insetti

Sfida

✔️Bassa concentrazione di virus;
✔️ Inibitori come sali, metaboliti
e componenti macromolecolari solubili delle cellule.

Soluzione

✔️RNA carrier che aumentano il la capacità legante e il recupero; 
✔️Rimozione di potenziali inibitori attraverso semplici lavaggi con tampone alcolico.
NucleoSpin Virus

Sfida

✔️Struttura fisica e biochimica dei gusci in chitina.

Soluzione

✔️Lisi del campione mediante biglie con provette MN Bead tipo G
(in acciaio) (non incluse).
NucleoSpin RNA

Cellule e tessuti Terreno

Sfida

✔️Omogeneizzazione dei campioni incluso tessuti di topo
 (fegato,
cervello) e varie linee tumorali cellulari.

Soluzione

✔️Facile omogeneizzazione del campione
con NucleoSpin® Filters.
NucleoSpin RNA

Sfida

✔️Inibitori come polisaccaridi, urati e lipidi;
✔️Composizione del campione.

Soluzione

✔️La combinazione dell'omogeneizzazione meccanica e della lisi chimica permette un'ottimale resa dell'RNA;
✔️Rimozione degli inibitori con colonna
NucleoSpin® Inhibitor Removal.
NucleoSpin RNA Stool

FFPE-tessuti Feci

Sfida

✔️Rimozione paraffine;
✔️Decrosslinking dopo il fissaggio con formalina.

Soluzione

✔️Dissolutore di formalina (in attesa di brevetto);
✔️ Unico tampone per il decrosslink.
NucleoSpin TotalRNA FFPE

Sfida

✔️Composizione del campione non standard
(suolo forestale, sedimenti di fiume o
terreno coltivato);
✔️Alto contenuto di sostanze inibitrici
(sostanze umiche);
✔️ Basse quantità di RNA.

Soluzione

✔️Lisi del campione mediante biglie con provette MN Bead tipo A
(in ceramica);
✔️Tecnologia NucleoBond® permette il caricamento di alte quantità di campione e di ottenere RNA puro.
NucleoBond RNA Soil Mini

>Per maggiori informazioni   >Working with RNA Do it right!