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5'...G#A W T C...3' 3'...C T W A#G...5' L'enzima di restrizione PfeI riconosce i siti G^AWTC e taglia a 37°C in 5-15 minuti usando il tampone universale FastDigest Buffer. Questo enzima è un isoschizomero di TfiI avente la stessa specificità (nessun altro isoschizomero).